规格：50T 一、测定意义 谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase，GSH-PX）是机体内广泛存在的一种重要的催化过氧化氢分解的酶。它特异的催化还原型谷胱甘肽（GSH）对过氧化氢的还原反应，可以起到保护细胞膜结构和功能的完整的作用。GSH-PX的活性中心是硒半胱氨酸，硒是GSH-PX的必须部分，每克分子酶含4克原子硒。测定GSH-PX的活力可以作为衡量机体硒水平的一项生化指标。 二、测定原理 谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）可以促进过氧化氢还原型谷胱甘肽（GSH）反应生成水及氧化型谷胱甘肽（GSSG）,谷胱甘肽过氧化物酶的活力可用其酶促反应的速度来表示，测定此酶促反应中还原型谷胱甘肽的消耗，则可求出酶的活力。 GSH-PX的活力以催化GSH的反应速度来表示，由于这二个第五在没有酶的条件下，也能进行氧化还原反应（称非酶促反应），所以zui后计算次酶活力时必须扣除非酶促反应所引起的GSH减少的部分。 GSH量的测定：GSH的二硫代二硝基苯甲酸作用生成5-硫代二硝基苯甲酸阴离子呈现较稳定的黄色，在412nm处测其吸光度即可计算出GSH的量。 三、实验中所需的仪器和自备的试剂 1. 412nm的分光光度计 2. 37℃恒温水浴锅 3. 台式离心机 4. 可调式移液器 5. 蒸馏水 四、试剂盒的组成和配制 1、100管试剂盒的组成和配制： a、100管试剂盒的组成和保存： | 试剂编号 | 名称 | 数量及保存条件 | | 1 | 贮备液 | 2ml 1瓶 4℃保存6个月 | | 2 | 甲粉 | 1瓶 | | 乙粉 | 1瓶 | | 3 | 粉剂 | 1瓶 | | 4 | 粉剂 | 1瓶 避光4℃保存 | | 5 | 粉剂 | 4支 避光4℃保存 | | 6 | GSH标准品粉剂 | 3.07mg 4支 | | 7 | GSH标准品溶剂贮备液 | 10ml 1瓶 4℃保存 | b、试剂的配制和保存： | 试剂编号 | 应用液的配制 | 保存条件 | | 1 | 用时取0.1ml加蒸馏水至10ml，也就等于是100倍稀释配成应用液。现用现配；需多少配多少 | 4℃ | | 2 | 甲粉：加90-100℃的热蒸馏水170ml，充分*溶解 | | | 乙粉：加90-100℃的热蒸馏水5ml，充分*溶解 | | | 试剂二应用液的配制：将已配好的甲乙两种溶液混合。此为过饱和溶液，室温静置冷却后，如有结晶，则取上清进行实验 | 4℃或室温保存 | | 3 | 加蒸馏水200ml溶解 | | | 4 | 加蒸馏水50ml溶解 | 避光4℃保存 | | 5 | 每支加蒸馏水10ml溶解 | 避光冷藏保存5天 | | 7 | 标准品溶剂应用液：GSH标准品溶剂贮备液：双蒸水=1：9即10倍稀释配成应用液；按所需量现用现配 | 4℃保存 | C、GSH应用液的配制： | 1mmol/L GSH溶液 | GSH的分子量为307，每次测定前将1支3.07mg的GSH标准品粉剂加到GSH标准品的溶剂应用液中，定容至10ml即为1mmol/L的GSH溶液，现用现配。 | | 100u mol/L GSH溶液 | 取1mmol/L GSH溶液2ml加GSH标准品溶剂应用液18ml定容至20ml，作标准曲线用，若不做标准曲线可以不配。 | | 20umol/L的GSH标准溶液 | 取1mmol/L GSH溶液0.2ml加GSH标准品溶剂应用液定容至10ml。即为20umol/L的GSH标准溶液。 | 2、50管试剂盒的组成和配制： a、50管试剂盒的组成和保存： | 试剂编号 | 名称 | 数量及保存条件 | | 1 | 贮备液 | 1ml 1瓶 4℃保存6个月 | | 2 | 甲粉 | 1瓶 | | 乙粉 | 1瓶 | | 3 | 粉剂 | 1瓶 | | 4 | 液体 | 25ml 1瓶 避光4℃保存 | | 5 | 粉剂 | 2支 避光4℃保存 | | 6 | GSH标准品粉剂 | 3.07mg 2支 | | 7 | GSH标准品溶剂贮备液 | 5ml 1瓶 4℃保存 | b、试剂的配制和保存： | 试剂编号 | 应用液的配制 | 保存条件 | | 1 | 用时取0.1ml加蒸馏水至10ml。也就等于是100倍稀释配成应用液。现用现配。 | 4℃ | | 2 | 甲粉：加90-100℃的热蒸馏水85ml，充分*溶解 | | | 乙粉：加90-100℃的热蒸馏水25ml，充分*溶解 | | | 试剂二应用液的配制：将已配好的甲乙两种混合。此为过饱和溶液，室温静置冷却后，如有结晶，则取上清进行实验。 | 4℃或室温保存 | | 3 | 加蒸馏水100ml溶解 | | | 4 | 直接加量 | 避光 4℃保存 | | 5 | 每支加蒸馏水10ml溶解 | 避光冷藏 保存五天 | | 7 | 标准品溶剂应用液：GSH标准品溶剂贮备液：双蒸水=1：9即10倍稀释配成应用液；按所需量现用现配 | 4℃保存 | C、GSH应用液的配制： | 1mmol/L GSH溶液 | GSH的分子量为307，每次测定前将1支3.07mg的GSH标准品粉剂加到GSH标准品的溶剂应用液中，定容至10ml即为1mmol/L的GSH溶液，现用现配。 | | 100u mol/L GSH溶液 | 取1mmol/L GSH溶液2ml加GSH标准品溶剂应用液18ml定容至20ml，作标准曲线用，若不做标准曲线可以不配。 | | 20umol/L的GSH标准溶液 | 取1mmol/L GSH溶液0.2ml加GSH标准品溶剂应用液定容至10ml。即为20umol/L的GSH标准溶液。 | |
